Зачем нужен
- Санитарная микробиология воды. Колиформные бактерии оксидазоотрицательны. Тест отсекает оксидазоположительные бактерии — например, аэромонады, — которые могут давать на лактозных средах колонии, похожие на колиформные.
- Идентификация. Оксидазоположительны Pseudomonas aeruginosa, Aeromonas, Vibrio, Neisseria, Campylobacter и многие другие бактерии. Представители порядка Enterobacterales оксидазоотрицательны — с редким исключением Plesiomonas shigelloides.
Реактив и полоски
Реактив — водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина (оксидазный реактив Ковача; не путайте его с реактивом Ковача для индольного теста). Цитохромоксидаза окисляет его, и он становится тёмно-фиолетовым. Раствор неустойчив, окисляется на воздухе и на свету, поэтому его готовят свежим или хранят по инструкции, а пожелтевший или посиневший реактив не используют.
Удобнее готовые полоски или диски, пропитанные реактивом: их хранят сухими, а перед тестом при необходимости смачивают водой.
Как ставить
- Возьмите культуру 18–24 ч с неселективной среды, например с питательного агара.
- Пластиковой или деревянной палочкой, платиновой петлёй или стеклянной палочкой нанесите часть колонии на полоску или на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом.
- Учитывайте время строго: - фиолетовое или синее окрашивание в течение примерно 10 секунд — положительный результат; - окраска позже установленного производителем времени — не учитывается; - нет изменения цвета — отрицательный результат.
Точное время учёта указано в инструкции к реактиву или полоскам: при позднем учёте реактив окисляется сам на воздухе.
Контроль
Положительный контроль — Pseudomonas aeruginosa, отрицательный — Escherichia coli. Проверяйте каждую новую партию полосок или реактива.
Ложные результаты
| Ошибка | Результат | Почему |
|---|---|---|
| нихромовая или стальная петля | ложноположительный | металл окисляет реактив |
| колонии с сред с высоким содержанием глюкозы | ложноотрицательный | кислота от сбраживания подавляет реакцию |
| колонии с окрашенных селективных сред (Эндо, среды с красителями) | искажённый | цвет колонии и компоненты среды мешают учёту |
| учёт после установленного времени | ложноположительный | реактив окисляется кислородом воздуха |
| старая культура | ложноотрицательный | ферментная активность снижена |
Если методика допускает постановку теста прямо с фильтра или с колоний на дифференциальной среде, следуйте ей — но при сомнительных результатах пересейте культуру на питательный агар.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.