Состав и принцип
Основа среды — питательный агар с лактозой. Дифференцирующую систему образуют два компонента: основной фуксин (красный краситель) и сульфит натрия. Сульфит обесцвечивает фуксин, и готовая среда получается бледно-розовой.
Бактерии, которые сбраживают лактозу, образуют кислоту и альдегиды. Альдегид связывается с сульфитом и высвобождает краситель — колония и среда под ней краснеют. У кишечной палочки альдегида образуется так много, что краситель выпадает на поверхности колонии кристаллами, и она приобретает характерный золотисто-зелёный металлический блеск.
Сульфит натрия и фуксин заодно подавляют рост большинства грамположительных бактерий, поэтому среда умеренно селективна.
Как выглядят колонии
| Микроорганизмы | Колонии на среде Эндо |
|---|---|
| Escherichia coli | тёмно-красные, часто с золотисто-зелёным металлическим блеском |
| другие лактозоположительные колиформы (Klebsiella, Enterobacter, часть Citrobacter) | красные или розовые, без блеска или со слабым блеском, нередко слизистые |
| лактозоотрицательные бактерии (сальмонеллы, шигеллы, протеи) | бесцветные или бледно-розовые, прозрачные |
Внешний вид колоний — повод для подтверждения, а не окончательный ответ. Металлический блеск бывает не у всех штаммов E. coli и иногда появляется у других бактерий.
Где применяется
- Вода — выявление колиформных бактерий методом мембранной фильтрации: фильтр кладут на среду, затем подтверждают подозрительные колонии.
- Пищевая продукция — подтверждение БГКП после накопления в жидкой лактозной среде (ГОСТ 31747-2012).
- Клиническая микробиология — выделение энтеробактерий из клинического материала.
Будет ли в вашем анализе использоваться именно Эндо, определяет методика: в части новых методов её заменили хромогенными средами — о них отдельная статья.
Приготовление и хранение
- Сухую среду готовят строго по инструкции производителя. У разных производителей режим различается: одни прописи доводят до кипения, другие автоклавируют.
- Готовая среда чувствительна к свету и кислороду: на свету сульфит окисляется, и среда краснеет. Чашки хранят в темноте при 2–8 °C, срок хранения — по инструкции.
- Если готовая среда стала заметно красной до посева, она непригодна — дифференцирующие свойства потеряны.
- Основной фуксин токсичен: сухую среду взвешивают аккуратно, не допуская пыли.
Контроль готовой среды — стерильность, ростовые и дифференцирующие свойства на тест-штаммах — по ГОСТ ISO 11133-2016 и методике. Рассчитать навеску на нужное число чашек и напечатать этикетки можно в калькуляторе сред.
Типичные ошибки
- Нет металлического блеска у контрольной E. coli. Причины: среда окислилась или перегрета, нарушены время или температура инкубации, слишком толстый или слишком тонкий слой среды. Проверьте среду на тест-штамме из другой партии.
- Красные колонии считают колиформами без подтверждения. Лактозу на Эндо могут сбраживать и не колиформные бактерии, например аэромонады. Их отсекает оксидазный тест: колиформы оксидазоотрицательны.
- Оксидазный тест с колоний на Эндо ставят небрежно. Ставить его прямо с колоний на Эндо можно — так предусматривают методики для воды. Часть колонии наносят штрихом на бумагу с реактивом стеклянной палочкой или платиновой петлёй; нихромовая петля даёт ложноположительную реакцию. Если у тёмно-красной колонии результат нечёткий, пересейте её на питательный агар и повторите тест.
- Среду хранят на свету или используют после окончания срока.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.