Принцип
Если смешать раствор хлорида бария с серной кислотой, образуется нерастворимый сульфат бария — мелкая белая взвесь. Её мутность подобрана так, чтобы соответствовать мутности бактериальной суспензии с известной концентрацией. Стандарт 0,5 по мутности соответствует примерно 1,5 × 10⁸ КОЕ/мл — для энтеробактерий и других бактерий такого же размера клеток; для мелких и крупных клеток соответствие приблизительное.
Приготовление стандарта 0,5
- Приготовьте 1,175-процентный (масса/объём) раствор дигидрата хлорида бария (BaCl₂·2H₂O) — это 0,048 моль/л.
- Приготовьте 1-процентный (объём/объём) раствор серной кислоты — 0,18 моль/л.
- Смешайте 0,05 мл раствора хлорида бария и 9,95 мл раствора серной кислоты, постоянно перемешивая.
- Разлейте по 4–6 мл в пробирки того же диаметра, что и пробирки, в которых готовят суспензии бактерий, и плотно закройте.
Готовые стандарты разных номеров выпускаются и промышленно — в том числе в виде латексных суспензий, которые меньше оседают.
Проверка
Оптическую плотность стандарта 0,5 измеряют на спектрофотометре при длине волны 625 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. По МУК 4.2.1890-04 она должна быть в пределах 0,08–0,10 (в стандарте CLSI M02 допускается 0,08–0,13). По МУК оптическую плотность проверяют или стандарт обновляют ежемесячно, а также при сомнениях — например, если стандарт стал выглядеть иначе.
Хранение
- в темноте, при комнатной температуре, плотно закрытым, чтобы не испарялся;
- перед каждым использованием энергично перемешивайте на вортексе: сульфат бария оседает;
- выбросьте стандарт, если в нём появились крупные хлопья или комки.
Как пользоваться
- Суспендируйте несколько однотипных колоний 18–24-часовой культуры в стерильном физиологическом растворе или бульоне.
- Сравните мутность суспензии со стандартом в проходящем свете на фоне белого листа с чёрными линиями.
- Доведите мутность: добавьте культуру, если суспензия прозрачнее стандарта, или раствор, если мутнее.
- Используйте суспензию в течение времени, указанного в методике, — обычно в пределах 15 минут после приготовления.
Вместо визуального сравнения удобно использовать денситометр, проверенный по стандартам.
Типичные ошибки
- пробирки стандарта и суспензии разного диаметра — сравнение неверно;
- стандарт не перемешали — мутность занижена;
- суспензию приготовили из одной колонии — берут несколько однотипных, чтобы не попасть на нетипичный вариант, — или захватили вместе с колониями среду;
- инокулюм выдержали слишком долго — концентрация изменилась из-за роста или гибели бактерий.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.