Зачем
Подтверждающие тесты, окраска и биохимическая идентификация имеют смысл только для чистой культуры — культуры одного вида (штамма), полученной из одной изолированной колонии. Из смеси бактерий получится смесь реакций. Посев штрихом разделяет клетки механически: с каждым следующим сектором на петле остаётся всё меньше бактерий.
Схема на четыре сектора
- Подготовьте чашку. Поверхность агара должна быть сухой: капли конденсата растащат бактерии по всей чашке. Подпишите дно, а не крышку.
- Сектор 1. Простерилизуйте и остудите петлю, возьмите материал — часть колонии или каплю жидкой культуры — и нанесите его частыми зигзагообразными штрихами на участок у края чашки, примерно на четверть поверхности.
- Прожгите и остудите петлю. Остудить можно, коснувшись агара в свободном месте: горячая петля убивает клетки и плавит агар.
- Сектор 2. Проведите петлёй 2–3 раза через конец сектора 1 и продолжите зигзагом на соседний участок, не возвращаясь в сектор 1.
- Сектор 3. Снова прожгите петлю, захватите конец сектора 2 и продолжите зигзаг.
- Сектор 4. Так же из сектора 3 — штрихи реже, и последний штрих ведите к центру чашки, не касаясь сектора 1.
- Инкубируйте чашку вверх дном при нужной температуре.
Вместо обжига можно брать новую одноразовую петлю для каждого сектора.
Техника
- Петля скользит по поверхности агара под небольшим углом, не врезаясь в него: прорезанный агар даёт рост в толще, и колонии хуже разделяются.
- Крышку держите над чашкой, приоткрывая на минимальное время.
- Материала берите немного: чем гуще исходный посев, тем больше секторов нужно, чтобы дойти до изолированных колоний.
Как оценить результат
В первом секторе — сплошной рост, во втором — сливающиеся колонии, в третьем и четвёртом — отдельные колонии. Для дальнейшей работы берите хорошо изолированную типичную колонию, не касаясь соседних.
Если все колонии одинаковые по виду — это ещё не гарантия чистоты. Перед идентификацией проверьте чистоту культуры окраской по Граму или повторным посевом штрихом.
Почему колонии не разделились
| Что видно | Причина |
|---|---|
| сплошной рост по всей чашке | слишком много материала; петлю не прожигали между секторами; влажная поверхность |
| колонии только в первом секторе | петля была горячей; слишком мало материала |
| рост по следу петли в толще агара | петлю сильно прижимали, агар прорезан |
| ползучий рост, вуаль по поверхности | подвижные бактерии, например протеи; влажная среда. Помогают более сухие или специальные среды, подавляющие роение |
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.