Порядок работы
- Проверьте сухую среду. Срок годности, целостность упаковки, отсутствие комков и изменения цвета. Сухие среды гигроскопичны: открытую банку плотно закрывают и хранят в сухом месте.
- Рассчитайте навеску на нужный объём с небольшим запасом — например, в калькуляторе сред.
- Взвесьте навеску на поверенных весах, не допуская пыли: часть сред содержит токсичные компоненты — красители, селениты, азид.
- Возьмите воду нужного качества — дистиллированную или деионизированную по требованиям методики. Вода из-под крана или с неизвестной проводимостью влияет на рост и pH.
- Растворите. Порошок высыпают в воду, а не наоборот, дают набухнуть несколько минут, затем нагревают при перемешивании до полного растворения агара — до кипения, если этого требует инструкция.
- Стерилизуйте по инструкции производителя — чаще всего автоклавированием при 121 °C; часть сред только кипятят, а термолабильные добавки вносят после стерилизации. Объём в одной ёмкости не должен быть больше, чем позволяет режим: большие объёмы прогреваются дольше.
- Охладите до 45–50 °C на водяной бане. Не оставляйте среду в бане на много часов.
- Внесите добавки — кровь, антибиотики, эмульсию желтка, теллурит — асептически в остуженную среду и аккуратно перемешайте без пены.
- Проверьте pH — в пробе среды после стерилизации и охлаждения до 25 °C. Допуск указан в инструкции.
- Разлейте в чашки — для чашек диаметром 90 мм обычно 15–20 мл, это слой толщиной около 3 мм. Пузыри с поверхности убирают, проведя пламенем горелки.
- Подсушите чашки, если на поверхности есть влага, — иначе колонии сливаются и ползут.
- Промаркируйте и запишите: название среды, номер серии лаборатории, дата приготовления и срок годности, кто приготовил. Этикетки можно напечатать в калькуляторе сред, журнал — в разделе «Журналы».
Контроль качества готовой среды
По ГОСТ ISO 11133-2016 и МУК 4.2.2316-08 у каждой серии среды проверяют:
- внешний вид: цвет, прозрачность, отсутствие осадка и комков, толщину слоя;
- pH после стерилизации;
- стерильность: часть чашек или пробирок инкубируют без посева;
- рабочие характеристики на тест-штаммах: ростовые свойства (продуктивность), для селективных сред — подавление сопутствующей микрофлоры, для дифференциальных — типичный вид колоний.
Какие тест-штаммы использовать и как их хранить — в статье о тест-штаммах.
Хранение готовых сред
- Чашки хранят крышками вниз в пакетах или закрытых контейнерах, чтобы среда не высыхала, обычно при 2–8 °C в темноте.
- Срок годности готовой среды устанавливает производитель или сама лаборатория — по результатам проверки рабочих характеристик в конце срока.
- Расплавлять агаризованную среду повторно можно только один раз и только если это допускает методика.
Типичные ошибки
| Ошибка | Что получится |
|---|---|
| перегрев, долгое кипячение, повторное автоклавирование | среда темнеет, сахара карамелизуются, pH смещается, агар плохо застывает |
| добавки внесены в горячую среду | антибиотики и кровь разрушаются |
| pH измерен в горячей среде | значение отличается от истинного при 25 °C |
| не перемешали после растворения или добавок | неоднородная среда, разные чашки ведут себя по-разному |
| конденсат на крышках и поверхности | ползучий рост, сливающиеся колонии, загрязнение |
| слишком тонкий слой | среда быстро высыхает, рост слабее, гемолиз и цвет хуже видны |
| нет контроля стерильности | загрязнённая серия используется в анализах |
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.