Принцип
В среду добавляют хромогенный субстрат — молекулу, состоящую из сахара или другого остатка, который узнаёт определённый фермент, и бесцветной части-хромофора. Если у бактерии есть этот фермент, он отщепляет хромофор, тот окисляется и становится окрашенным нерастворимым веществом. Краситель остаётся в колонии, и колония приобретает цвет.
Флуорогенные субстраты работают так же, но продукт светится в ультрафиолете. Классический пример — МУГ (4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид): колонии кишечной палочки светятся голубым при освещении длинноволновым ультрафиолетом.
Какие ферменты выявляют
| Фермент | У кого есть | Зачем |
|---|---|---|
| β-D-галактозидаза | колиформные бактерии | признак колиформ |
| β-D-глюкуронидаза | большинство штаммов E. coli | отличает E. coli от других колиформ |
| β-D-глюкозидаза | листерии, энтерококки и др. | основа сред для листерий |
| фосфолипаза C | L. monocytogenes и L. ivanovii | непрозрачный ореол вокруг колонии на средах для листерий |
| разные ферменты дрожжей | виды Candida | различение видов по цвету |
Примеры
- Колиформы и E. coli в воде. На хромогенном колиформном агаре другие колиформы дают розово-красные колонии (β-галактозидаза), а E. coli — тёмно-синие или фиолетовые (обе активности). Так устроен, например, метод международного стандарта ISO 9308-1 в редакции 2014 года.
- Листерии. На среде ALOA все листерии дают сине-зелёные колонии, а у L. monocytogenes и L. ivanovii вокруг колонии есть ещё непрозрачный ореол. Различают их при подтверждении — по сбраживанию рамнозы и ксилозы и гемолизу. ALOA — основная среда международного метода ISO 11290-1; российский стандарт на выявление листерий — ГОСТ 32031-2022.
- Сальмонеллы, стафилококки, дрожжи Candida, устойчивые к антибиотикам бактерии — для всех этих групп есть хромогенные среды.
Преимущества
- результат часто за одни сутки без пересева;
- меньше подтверждающих тестов: цвет отражает фермент, а не только сбраживание сахара;
- колонии разных групп легко различить на одной чашке.
Ограничения
- Не все штаммы «по учебнику». Часть E. coli, в том числе многие штаммы серогруппы O157, не имеют β-глюкуронидазы и на хромогенной среде выглядят как обычные колиформы. И наоборот, β-глюкуронидаза встречается у части шигелл и сальмонелл.
- Цвет зависит от условий. Свет, перегрев при приготовлении, время инкубации и густота роста меняют окраску. Учитывайте посевы в сроки, указанные в методике, и сравнивайте с контрольными штаммами.
- Среда должна быть та, что в методике. Хромогенные среды разных производителей отличаются по составу и цветам колоний. Замена среды — изменение методики, и её нужно подтвердить верификацией.
- Дороже классических сред. Экономия обычно достигается за счёт меньшего объёма подтверждения.
Хранение
Хромогенные субстраты чувствительны к свету и нагреванию. Готовые чашки хранят в темноте при 2–8 °C, не перегревают среду при расплавлении и не держат её долго в водяной бане.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.