Как устроена среда
- Питательная основа — мясо-пептонный или печёночный бульон с глюкозой.
- Кусочки варёной печени или мяса на дне пробирки. Они поглощают растворённый кислород и выделяют восстанавливающие вещества, понижая окислительно-восстановительный потенциал среды.
- Слой вазелинового масла сверху препятствует проникновению кислорода воздуха.
Так в обычной пробирке без анаэростата получаются условия, в которых растут строгие анаэробы.
Регенерация перед посевом
При хранении в среду из воздуха постепенно проникает кислород. Поэтому перед посевом среду регенерируют: пробирки прогревают на кипящей водяной бане, чтобы удалить растворённый кислород, а затем быстро охлаждают до температуры посева. Посев делают сразу после охлаждения, пока кислород не вернулся. Время прогрева — по методике или инструкции производителя.
Посев и признаки роста
Материал вносят пипеткой на дно пробирки, под слой масла, не перемешивая среду с воздухом. Признаки роста анаэробов — помутнение, пузырьки газа, характерный гнилостный или масляный запах при вскрытии; протеолитические клостридии могут частично переваривать кусочки печени или мяса и вызывать их почернение.
Рост в среде — только накопление. Для идентификации культуру пересевают на плотные среды и инкубируют в анаэробных условиях.
Где применяется
- выделение и накопление клостридий и других анаэробов из пищевых продуктов, воды, почвы;
- анализ консервов на промышленную стерильность — для выявления анаэробной микрофлоры;
- поддержание культур анаэробов.
Для контроля стерильности лекарственных средств в фармакопее используют другую среду — жидкую тиогликолевую.
Типичные ошибки
- Среду не регенерировали или посеяли через долгое время после охлаждения — анаэробы не выросли, результат ложноотрицательный.
- Посев внесли в слой масла или встряхнули пробирку — нарушены анаэробные условия.
- Нет контроля — в каждой серии ставьте посев тест-штамма анаэроба, например клостридии, и контроль стерильности незасеянной среды.
- Слишком тонкий слой масла или его нет совсем.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.