Состав и приготовление
Кровяной агар готовят из питательной основы — например, триптиказо-соевого или колумбийского агара — и дефибринированной крови животного, обычно баранов, реже лошадей. Чаще всего кровь добавляют в количестве около 5 %.
Основу стерилизуют, охлаждают до 45–50 °C и только тогда асептически вносят кровь: в горячей среде эритроциты разрушатся, и среда станет тёмно-коричневой — это уже «шоколадный агар», у которого другие свойства и назначение. После внесения крови среду перемешивают без пены и разливают по чашкам.
Что растёт
Кровь — богатый источник питательных веществ, поэтому на кровяном агаре растут многие требовательные бактерии: стрептококки, пневмококки, листерии, коринебактерии, а также стафилококки и энтеробактерии. Для стрептококков и пневмококков посевы часто инкубируют в атмосфере с повышенным содержанием CO₂.
Агар с бараньей кровью плохо подходит для гемофилов: ферменты бараньей крови разрушают нужный им фактор V. Для них используют шоколадный агар или лошадиную кровь.
Типы гемолиза
| Тип | Как выглядит | Что происходит | Примеры |
|---|---|---|---|
| β (бета) | прозрачная бесцветная зона вокруг колонии, через неё видно текст | полное разрушение эритроцитов | Streptococcus pyogenes, многие штаммы Staphylococcus aureus; у Listeria monocytogenes — узкая зона под колонией |
| α (альфа) | зеленоватая или буроватая мутная зона | частичное разрушение и окисление гемоглобина | Streptococcus pneumoniae, стрептококки группы viridans |
| γ (гамма) | изменений нет | гемолиза нет | большинство энтерококков, Listeria innocua |
Смотрите гемолиз в проходящем свете, подняв чашку к источнику света. У части бактерий зона хорошо видна только под колонией: колонию можно аккуратно сдвинуть петлёй.
От чего зависит картина гемолиза
- Вид крови. Одни и те же бактерии на бараньей и лошадиной крови могут давать разный гемолиз.
- Атмосфера. Анаэробные условия и CO₂ усиливают гемолиз у части стрептококков: часть их гемолизинов чувствительна к кислороду, поэтому при посеве уколом в толщу среды зона вокруг укола бывает шире.
- Время инкубации. Через 18–24 ч и через 48 ч картина может меняться.
- Толщина слоя и свежесть среды. Старая среда или слишком тонкий слой дают нечёткую зону.
Применение в пищевой микробиологии
В пищевых лабораториях кровяной агар нужен прежде всего для подтверждения листерий: Listeria monocytogenes даёт узкую зону β-гемолиза, а распространённая непатогенная L. innocua — нет. Порядок подтверждения — в ГОСТ 32031-2022.
Типичные ошибки
- Кровь внесли в слишком горячую основу — среда побурела.
- Использовали кровь с консервантом или антибиотиками — рост требовательных бактерий подавлен.
- Не учли, что α-гемолиз и γ-гемолиз при плохом освещении путают; ставьте рядом контрольные штаммы.
- Делают каталазный тест прямо с кровяного агара, захватив среду: эритроциты сами содержат каталазу, и результат будет ложноположительным — подробно в статье о каталазном тесте.
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.