Состав и принцип
ЖСА готовят из питательного агара, хлорида натрия и яичного желтка. Единой прописи нет — количество соли и желтка зависит от документа:
| Документ | Соль | Желток |
|---|---|---|
| ГОСТ 10444.1-84, п. 5.8 | 95 г на 1 л мясо-пептонного агара, в котором уже есть 5 г соли, — всего около 10 % (после внесения желтка немного меньше) | 100 мл яично-желточной взвеси на 1 л (взвесь — желток в 100 мл физиологического раствора) |
| ГОСТ 30347-2016, п. 6.2.2 (молоко и молочная продукция) | 75 г на 1 л (с 35 г сухого питательного агара) | 50 мл желточной эмульсии на 1 л |
Работают два компонента:
- Соль. Стафилококки солеустойчивы и растут при концентрации хлорида натрия, которая подавляет большинство других бактерий. На этом же принципе построены молочно-солевой агар и солевой бульон, который используют для накопления.
- Желток. В нём есть лецитин и липопротеин лецитовителлин. Ферменты многих штаммов S. aureus расщепляют их, нерастворимые продукты выпадают в осадок, и вокруг колонии появляется зона помутнения с радужным кольцом — «радужный венчик». Эту реакцию называют лецитовителлазной (ЛВА), в ГОСТ 31746-2012 — лецитиназной активностью.
Как выглядят колонии
| Микроорганизмы | Колонии на ЖСА |
|---|---|
| S. aureus с лецитовителлазной активностью | плоские диски 2–4 мм с ровными краями, белые, кремовые, жёлтые, лимонные или золотистые; вокруг — зона помутнения и радужное кольцо (описание по ГОСТ 30347-2016) |
| S. aureus без лецитовителлазной активности | такие же по форме и пигменту колонии, но без венчика |
| коагулазоотрицательные стафилококки, например Staphylococcus epidermidis | растут, как правило, без венчика |
| большинство других бактерий | подавлены солью |
Венчик — повод взять колонию в работу, а не ответ. По МУК 4.2.4180-25 (п. 2.5) лецитовителлазную реакцию дают 60–70 % изолятов S. aureus, выделенных от человека, то есть примерно у трети штаммов венчика нет. Для стафилококков животного происхождения старая инструкция к приказу Минздрава СССР № 720 (1978) приводила ещё меньшую долю — 5–10 %. Для лабораторий, которые исследуют молоко и мясо, это особенно важно.
Где применяется
- Воздух в медицинских организациях. С 30 июля 2026 года действуют МУК 4.2.4180-25 «Методы санитарно-микробиологических исследований в организациях, осуществляющих медицинскую деятельность», введённые взамен МУК 4.2.2942-11. По п. 2.5 пробы воздуха на S. aureus отбирают на одну из желточно-солевых сред — элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среду № 10 — либо на агар Бэрд-Паркера и инкубируют при (37 ± 1) °C (48 ± 2) ч. Прежние МУК предусматривали тот же набор сред; если в области аккредитации лаборатории ещё указан старый документ, её стоит актуализировать.
- Смывы с поверхностей, рук и санитарной одежды на пищевых предприятиях, в общепите и торговле. По МР 4.2.0220-20 (п. 3.4) смыв сначала сеют в солевой бульон с 6,5 % хлорида натрия, а через 18–24 ч пересевают на одну из селективных сред — в том числе ЖСА или агар Бэрд-Паркера. Чашки инкубируют при (37 ± 1) °C 18–48 ч. Смывы в медицинских организациях эти МР не охватывают — для них есть МУК 4.2.4180-25.
- Пищевая продукция. ГОСТ 31746-2012 допускает яично-желточно-солевой агар наряду с агаром Бэрд-Паркера, молочно-солевым и яично-желточно-азидным агаром; арбитражной средой там назван агар Бэрд-Паркера. Для молока и молочной продукции ЖСА входит в ГОСТ 30347-2016.
- Обследование на носительство. ЖСА — традиционная среда для первичного посева при обследовании на носительство S. aureus; её предусматривала ещё инструкция к приказу № 720 1978 года.
Приготовление и хранение
- По ГОСТ 10444.1-84 соль растворяют в расплавленном агаре, среду охлаждают до (45 ± 1) °C и только после этого добавляют желточную взвесь. В слишком горячей среде желток свернётся.
- Яйца берут свежие, скорлупу обрабатывают спиртом, желток отделяют асептически.
- Готовые чашки хранят в холодильнике не более 5 суток — так указано и в ГОСТ 10444.1-84, и в ГОСТ 30347-2016 (при (4 ± 2) °C).
- Сухую солевую основу готовят по инструкции производителя, желток вносят после стерилизации и охлаждения.
- Каждую партию проверяют на стерильность и на тест-штаммах по инструкции производителя или методике: обычно S. aureus должен дать рост с венчиком, коагулазоотрицательный стафилококк — рост без венчика. Общие правила контроля сред — в ГОСТ ISO 11133-2016 и статье о тест-штаммах.
Как подтверждают находку
- Отбор колоний. По МУК 4.2.4180-25 на скошенный агар пересевают не менее двух подозрительных колоний, а если на чашке есть колонии разного пигмента — не менее двух колоний разного вида. Прежние МУК 4.2.2942-11 и инструкция к приказу № 720 советовали брать в первую очередь колонии с венчиком, а при их отсутствии — пигментированные колонии, похожие на стафилококк.
- Окраска по Граму — грамположительные кокки, часто гроздьями. Порядок — в статье об окраске по Граму.
- Каталаза — стафилококки каталазоположительны; каталазный тест отличает их от стрептококков и энтерококков.
- Плазмокоагулаза — главный признак. Культуру смешивают с кроличьей плазмой и проверяют свёртывание через 4–6 ч, а при отрицательном результате — через 24 ч. Точные объёмы и оценку сгустка задаёт методика, например ГОСТ 31746-2012.
- Дополнительные тесты — при спорных результатах. По МУК 4.2.4180-25, если у культуры есть только плазмокоагулирующая или только лецитовителлазная активность, для ответа учитывают другие биохимические признаки; допускается и масс-спектрометрия MALDI-TOF. Обычно это ДНКаза или термостабильная нуклеаза, анаэробное сбраживание маннита, ацетоин и мальтоза для отличия S. aureus от других коагулазоположительных видов — по методике.
ЖСА и агар Бэрд-Паркера
| ЖСА | Агар Бэрд-Паркера | |
|---|---|---|
| Что подавляет постороннюю флору | высокая концентрация соли | хлорид лития, теллурит калия, глицин |
| Главный признак S. aureus | радужный венчик, пигмент | чёрные блестящие колонии с зоной просветления |
| Поддержка повреждённых клеток | специальных добавок нет | пируват натрия |
| Где применяется | санитарный контроль, носительство, часть пищевых методик | подсчёт коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах (ГОСТ 31746-2012, ISO 6888-1) |
| Подтверждение | коагулаза обязательна | коагулаза обязательна |
Подробнее — в статье об агаре Бэрд-Паркера.
Типичные ошибки
- Колонии без венчика не берут в работу. Так легко пропустить S. aureus: часть штаммов, особенно от животных, лецитовителлазной активности не имеет.
- Венчик принимают за окончательный ответ. Без коагулазного теста результат «S. aureus» выдавать нельзя.
- Желток внесли в горячую среду или чашки хранили дольше 5 суток.
- Чашки просматривают раньше срока методики — по МУК 4.2.4180-25 посевы воздуха инкубируют (48 ± 2) ч.
- Отбирают одну колонию при разнородном росте.
Источники
- ГОСТ 10444.1-84 — текст стандарта — пропись яично-желточно-солевого агара (п. 5.8) и яично-желточной взвеси (п. 4.2), срок хранения чашек
- ГОСТ 30347-2016 «Молоко и молочная продукция. Методы определения Staphylococcus aureus» — состав ЖСА, описание колоний, режим инкубации
- МУК 4.2.4180-25 на docs.cntd.ru — введены с 30.07.2026 взамен МУК 4.2.2942-11; среды и режим для S. aureus в воздухе (п. 2.5), доля изолятов с лецитовителлазной реакцией, отбор колоний
- МР 4.2.0220-20 на sudact.ru — область применения, исследование смывов на S. aureus (п. 3.4): солевой бульон, перечень сред, инкубация
- Приказ Минздрава СССР № 720, приложения — ЖСА при обследовании на носительство, частота лецитовителлазной реакции у штаммов от человека и животных
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.