Внутрилабораторный контроль в микробиологии: что проверять и как оформлять

Что требует ГОСТ ISO/IEC 17025-2019

Для аккредитованной лаборатории основной документ — ГОСТ ISO/IEC 17025-2019. Контролю посвящён пункт 7.7 «Обеспечение достоверности результатов».

• 7.7.1. Лаборатория должна иметь процедуру мониторинга достоверности результатов. Данные записывают так, чтобы были видны тенденции, и, где это практически возможно, обрабатывают статистически. Стандарт перечисляет способы, из которых выбирают подходящие, в том числе: стандартные образцы и материалы для контроля качества, проверки работоспособности оборудования, контрольные карты, промежуточные проверки, повторные испытания, повторное испытание сохранённых образцов, анализ полученных результатов, внутрилабораторные сличения, слепые (зашифрованные) образцы.
• 7.7.2. Сравнение с другими лабораториями, где это возможно и применимо, — участие в проверках квалификации или в других межлабораторных сличениях.
• 7.7.3. Данные мониторинга анализируют и используют для управления работой лаборатории и, где возможно, для её улучшения. Если результаты вышли за установленные критерии, принимают меры, чтобы неверный результат не попал в протокол.

Как выполнять 7.7.2, разъясняет руководство Росаккредитации СМ № 04.1-1.0019, действующее с 1 января 2025 года. Проверка квалификации названа в нём самым надёжным вариантом, а жёсткой периодичности нет: лаборатория сама планирует участие с учётом рисков и своей области аккредитации.

Микробиологическую специфику добавляет ГОСТ ISO 7218-2015 (раздел 15). Программа периодических проверок должна показывать, что разброс между сотрудниками, оборудованием и материалами под контролем, и охватывать все исследования лаборатории. В неё могут входить искусственно заражённые и естественно загрязнённые образцы, стандартные образцы, параллельные испытания и параллельная оценка результатов. Тот же стандарт требует регулярно участвовать в проверках квалификации, предпочтительно на подходящих матрицах.

Из чего состоит ВЛК

Документы иногда расходятся: по ГОСТ ISO 7218-2015 температуру холодильной камеры проверяют ежедневно и держат, если не указано иное, (5 ± 3) °C, а в МУ 2.1.4.1057-01 для холодильников указаны еженедельный контроль и 4–8 °C. Закрепите частоту, которая удовлетворяет всем методикам из вашей области аккредитации. Как вести тест-штаммы, чтобы контроль сред имел смысл, — в статьях о тест-штаммах и о хранении культур.

Контроль сотрудников

Результат во многом зависит от рук: пипетирования, разведений, подсчёта колоний. ГОСТ ISO 7218-2015 (пп. 4.2–4.3) требует регулярно оценивать квалификацию по объективным критериям — через внутренний контроль, проверку квалификации, стандартные образцы или тесты самооценки при подсчёте.

Практические формы:

• параллельный подсчёт — одни и те же чашки независимо считают два сотрудника;
• параллельные посевы — одну пробу или искусственно заражённый образец анализируют разные сотрудники;
• слепые пробы — исполнитель не знает, что перед ним контрольный образец и сколько в нём микроорганизмов;
• стандартные образцы с известным содержанием КОЕ — проверяют всю цепочку, от разведения до подсчёта.

Критерий допустимого расхождения закрепляют в процедуре лаборатории. Учитывайте случайный разброс: даже при безупречной работе число колоний колеблется. По таблице 1 ГОСТ ISO 11133-2016 95-процентный интервал для 100 подсчитанных колоний — 80–120, а для 10 колоний — 4–16. Поэтому сравнивать операторов удобнее на чашках со счётным числом колоний — о диапазонах в статье «Сколько колоний считать на чашке».

Для исследований, которые выполняют очень редко, ГОСТ ISO 7218-2015 (п. 15.1.3) допускает подтверждать исполнение параллельно с самим испытанием, а не по плановому графику.

Контрольные карты

Контрольная карта Шухарта — график результатов контроля по порядку их получения со средней линией и границами: предупреждения (±2s) и действия (±3s). Точки за границей действия или длинная серия по одну сторону средней линии — повод искать причину: партию среды, термостат, разбавитель, оператора, тест-штамм. В записях фиксируют и причину, и принятые меры.

• Среды. Приложение G ГОСТ ISO 11133-2016 (обязательное) описывает контрольные графики для количественных испытаний плотных сред по коэффициенту производительности — отношению числа колоний на испытуемой и на эталонной среде. Для новой карты нужно не менее 10 испытаний на разных партиях, лучше 20; границы периодически пересматривают, например после каждых 30 испытаний.
• Подсчёт КОЕ. Распределение подсчётов асимметрично, поэтому для статистической обработки их принято переводить в десятичные логарифмы — так, например, считают прецизионность в ГОСТ Р 54502-2011 (ISO/TS 19036). Карту для КОЕ тоже удобнее вести по lg КОЕ. Границы считают по установочной серии результатов, полученных в стабильных условиях, а новые точки сравнивают с ними.

Построить карту по своим данным, в том числе в логарифмах, можно в калькуляторе контрольной карты.

МУ 2.1.4.1057-01 для лабораторий воды

Методические указания «Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды» введены в 2001 году. Изменение № 1 к ним — МУ 2.1.4.2899-11: в частности, в разделах о контроле фильтрации вместо мембранных фильтров теперь говорится о фильтрующих материалах с порами не более 0,45 мкм. Документ выделяет восемь направлений контроля и описывает:

• контроль температуры термостатов и холодильников;
• контроль стерилизаторов, воздуха, поверхностей, бактерицидных облучателей, фильтровальных установок, флаконов для отбора проб;
• контроль дистиллированной воды, посуды, серийных разведений;
• ведение эталонных культур — вариант с криохранением и без него;
• контроль питательных сред: при поступлении, при хранении, при каждой варке и количественный контроль новых серий. Среду признают приемлемой, если число колоний на ней достоверно не отличается от контрольной среды; как правило, процент извлекаемости (всхожести) при этом не ниже 80 %;
• контроль фильтрующих материалов: пригодны партии с процентом извлекаемости не ниже 80 %;
• положительные и отрицательные контроли при идентификации;
• таблицу периодичности всех процедур (приложение 2) и оценку различий по критерию Стьюдента (приложение 10).

Часть ссылок в МУ устарела — например, на МУК 4.2.1018-01, которые заменены МУК 4.2.3963-23. Организацию контроля берите из МУ, а режимы исследований — из действующей методики.

Как оформлять записи

• Технические записи по п. 7.5 ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 должны позволять повторить работу в близких условиях. В них указывают дату и исполнителя, первичные наблюдения записывают сразу при получении. Исправление оформляют так, чтобы оставались видны прежняя запись, дата, суть изменения и автор.
• Форма записей по МУ 2.1.4.1057-01 произвольная: журналы или контрольные листы, которые брошюруют за месяц, квартал или год; допускаются электронные носители. Исключение — формы журнала контроля стерилизаторов (приложение 4) и журнала приготовления и контроля сред (приложение 8.1).
• Анализ. Не реже раза в год результаты контрольных процедур анализируют и по итогам корректируют руководство по качеству (МУ 2.1.4.1057-01).
• Среды. Данные испытаний сред документируют и хранят нужный срок; для их оценки ГОСТ ISO 11133-2016 (п. 10.2) рекомендует контрольные диаграммы.

Шаблоны журналов температуры, приготовления сред и работы автоклава — в разделе «Журналы лаборатории».

Что проверить перед оценкой

Вопросы для самопроверки, которые следуют из требований перечисленных документов:

• есть ли план ВЛК и охватывает ли он все исследования из области аккредитации и всех исполнителей;
• анализируются ли результаты контроля, разобраны ли выходы за границы — с причиной и мерами;
• можно ли по записям проследить пассажи тест-штаммов и контроль конкретной партии среды;
• нет ли пропусков в журналах температуры и исправлений без даты и подписи;
• соответствует ли проверка квалификации профилю работ лаборатории.

Частые вопросы

Нужен ли ВЛК лаборатории без аккредитации? Да. Контроль сред, оборудования, положительные и отрицательные контроли предусмотрены самими методиками. МУ 2.1.4.1057-01 предназначены для всех лабораторий, которые исследуют воду для госсанэпиднадзора и производственного контроля, а для аккредитованных прямо названы обязательными. Аккредитация добавляет требования к системе в целом и к сравнению с другими лабораториями.

Чем ВЛК отличается от проверки квалификации? ВЛК — проверки внутри лаборатории (п. 7.7.1), проверка квалификации — внешнее сравнение с другими участниками (п. 7.7.2). Одно не заменяет другое.

Источники

• ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 — текст на meganorm.ru — пункты 7.5 и 7.7
• ГОСТ ISO 7218-2015 — текст на meganorm.ru — пункты 4.2–4.3, 5.8–5.10, раздел 15
• ГОСТ ISO 11133-2016 — карточка и текст на files.stroyinf.ru — таблица 1, пункт 10.2, приложение G
• МУ 2.1.4.1057-01 — текст на meganorm.ru — направления контроля, разделы 5–13, приложение 2
• Руководство Росаккредитации СМ № 04.1-1.0019 — pravo.ppt.ru — участие в проверках квалификации по п. 7.7.2

Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.