Коротко — для всех
Что это. Pseudomonas aeruginosa — грамотрицательная палочка, которая живёт в воде, почве, сточных водах. В отличие от кишечной палочки, она не говорит о фекальном загрязнении: ей хватает следов питательных веществ, она размножается прямо в воде и образует биоплёнки — слизистые налёты на стенках труб, фильтров и ёмкостей. Многие обеззараживающие средства она переносит лучше колиформных бактерий. Поэтому её находка — признак сбоя водоподготовки или плохого санитарного состояния системы.
Чем опасна. Это условно-патогенная бактерия. У здоровых людей после купания в загрязнённом бассейне или гидромассажной ванне она вызывает в основном поверхностные воспаления: зудящую сыпь вокруг волосяных луковиц, воспаление наружного уха, раздражение глаз. Тяжёлые инфекции она даёт там, где защита ослаблена: на ожогах, повреждённых глазах, у людей с ослабленным иммунитетом. Заражаются обычно при контакте с водой, а не друг от друга.
Почему ищут именно в бассейнах и упакованной воде. В бассейне тёплая вода, много людей и есть где образоваться биоплёнке. Упакованную воду после розлива уже никто не обеззараживает, а бактерия неприхотлива к питанию и может сохраняться в воде. Её находка в бутылке говорит о нарушениях водоподготовки или гигиены розлива.
Нормальный результат — «не обнаружено» в объёме, который указан в нормативе:
| Вода | Норматив | Документ |
|---|---|---|
| Бассейны и аквапарки | отсутствие в 500 мл | СанПиН 1.2.3685-21, таблица 3.10, основные показатели |
| Водопровод, в том числе горячая вода | отсутствие в 1 л; дополнительный показатель: по примечанию к таблице, если при анализе выросли оксидазоположительные бактерии, из дополнительных показателей определяют только P. aeruginosa | СанПиН 1.2.3685-21, таблица 3.5 и примечание к ней |
| Упакованная питьевая вода: обработанная, природная питьевая, для детского питания, искусственно минерализованная, купажированная | отсутствие в 250 мл | ТР ЕАЭС 044/2017, приложение 3, таблица 2 |
| Природная минеральная вода | отсутствие в 250 мл | ТР ЕАЭС 044/2017, приложение 2, таблица 2 |
Что делать, если синегнойную палочку нашли
Владельцу или оператору бассейна:
- Проверьте обеззараживание: концентрацию реагента и pH — по журналу и контрольным замером. Пропуски замеров и сбои дозатора реагента сами по себе — повод для разбора.
- Ищите биоплёнку: переливные лотки, накопительную ёмкость, фильтры, трубы, форсунки гидромассажа. Биоплёнка защищает бактерии от хлора, поэтому её нужно удалить механически, а не только поднять дозу реагента.
- После устранения причины повторите анализ. Порядок действий при несоответствии определяет программа производственного контроля и требования Роспотребнадзора.
Посетителю бассейна. После купания примите душ с мылом и снимите мокрый купальник. Если после бассейна появились сыпь, боль в ухе или покраснение глаз, обратитесь к врачу и скажите, где купались.
Покупателю упакованной воды. Находка P. aeruginosa в бутилированной воде означает, что партия не соответствует ТР ЕАЭС 044/2017. Не используйте эту воду для питья и сообщите производителю и в территориальный орган Роспотребнадзора.
Подробнее — для лабораторий
Методы по ГОСТ 34786-2021
ГОСТ 34786-2021 действует с 1 января 2022 года и распространяется на питьевую воду, в том числе горячую, воду бассейнов и аквапарков (кроме бальнеологических), упакованную воду, включая минеральную. Для P. aeruginosa в нём три пути:
- Накопление в жидкой среде (п. 11.1). К 500 или 250 мл пробы добавляют концентрат среды Бонде с кристаллическим фиолетовым и инкубируют при (36 ± 2) °C до 48 ч. Плёнку с поверхности помутневшей среды высевают на среду «Блеск» или агар с цетримидом. Результат качественный: «обнаружены» или «не обнаружены» в исследованном объёме.
- Мембранная фильтрация (п. 11.2) — по ГОСТ ISO 16266. Сноска стандарта отсылает к ГОСТ Р 54755-2011, но это действующий стандарт для пищевых продуктов, а не для воды. Межгосударственный ГОСТ ISO 16266-2018 с тем же методом мембранной фильтрации принят в 2018 году; введён ли он в действие в России, проверяйте по каталогу Росстандарта, а применяемую методику — по области аккредитации лаборатории.
- Ферментный тест-набор (п. 12.3). Реагент растворяют в 100 мл пробы, инкубируют при (36 ± 2) °C 24–28 ч; голубая флуоресценция под ультрафиолетом означает присутствие P. aeruginosa. В варианте с 51-луночными поддонами считают положительные лунки и находят НВЧ по таблице стандарта.
Для бассейнов МУК 4.2.3963-23 (п. 2.2) предусматривает пробу не менее 1000 мл на индикаторные бактерии и P. aeruginosa.
Схема ISO 16266: фильтр на цетримидном агаре
По эталонному методу ISO 16266:2006 пробу фильтруют, мембрану кладут на агар с цетримидом и налидиксовой кислотой (CN-агар), инкубируют при (36 ± 2) °C и учитывают через (22 ± 2) и (44 ± 4) ч.
| Колонии на мембране | Подтверждение | P. aeruginosa подтверждена, если |
|---|---|---|
| Сине-зелёные (пиоцианин) | не требуется | сразу |
| Без сине-зелёного пигмента, флуоресцируют под УФ | пересев на питательный агар, затем ацетамидный бульон | из ацетамида образуется аммиак (реактив Несслера) |
| Красновато-коричневые, не флуоресцируют | ацетамид, оксидазный тест, флуоресценция на среде Кинга B | все три теста положительны |
| Остальные | — | не P. aeruginosa |
Мембраны держат под ультрафиолетом недолго: долгое облучение губит колонии, и пересевать будет нечего.
Метод НВЧ: ГОСТ ISO 16266-2-2023
Стандарт — аутентичный перевод ISO 16266-2:2018, вводится в действие с 30 ноября 2026 года. Пробу вносят в жидкую среду с субстратом; ферменты P. aeruginosa отщепляют от него флуоресцирующее вещество, и положительные лунки светятся под ультрафиолетом. НВЧ находят по таблицам, подтверждённый результат получают за 24 ч без дополнительного подтверждения лунок. Метод рассчитан на питьевую и больничную воду, негазированную бутилированную воду, подземные воды, воду бассейнов и гидромассажных ванн. Для газированной и ароматизированной бутилированной воды, воды градирен и морской воды он не валидирован. Принцип расчёта НВЧ — в калькуляторе НВЧ, но для протокола берут таблицу стандарта.
Признаки вида
По ГОСТ 34786-2021 P. aeruginosa — подвижная оксидазоположительная палочка, аэроб, не образует спор. На средах она может давать пигменты: пиоцианин (сине-зелёный), пиовердин (жёлто-зелёный, флуоресцирует в ультрафиолете), пиорубин (красный). Классический дополнительный признак — рост при 41–42 °C. В обязательную схему ISO 16266 он не входит, но в исследовании изолятов с заводов розлива (Casanovas-Massana и соавт., 2010) рост при 4 и 42 °C вместе со средой Кинга A верно разделил все штаммы, включая два, пропущенных основными тестами ISO.
Типичные ошибки
- Ждут только пигмент. Часть штаммов не образует пиоцианин; бесцветные флуоресцирующие и красновато-коричневые колонии нужно подтверждать, а не отбрасывать.
- Доверяют одному блеску на среде «Блеск». По данным испытаний, опубликованных в журнале «Аналитика веществ и материалов» (2023), этот признак не специфичен для P. aeruginosa и зависит от состава среды.
- Не нейтрализован хлор. В пробы хлорированной воды, в том числе из бассейнов, вносят тиосульфат натрия — правила в статье об отборе проб воды.
- Проанализирован меньший объём, чем в нормативе. «Не обнаружено в 100 мл» нельзя сравнивать с нормой «отсутствие в 500 мл».
- Нет контроля среды. Каждую партию сред и тест-наборов проверяют на тест-штаммах, например P. aeruginosa ATCC 27853 и E. coli ATCC 25922 — подробнее в статье о тест-штаммах.
Результат трактует специалист. Статья объясняет смысл показателя, но не заменяет заключение по конкретной пробе и консультацию врача.
Источники
- СанПиН 1.2.3685-21, таблица 3.10 (КонсультантПлюс) — норматив для бассейнов и аквапарков; таблица 3.5 (водопровод, дополнительные показатели и примечания) — в том же документе
- ТР ЕАЭС 044/2017 в редакции решения № 97 от 05.10.2021 (Альта-Софт) — приложение 2 и приложение 3, таблицы 2: P. aeruginosa в 250 мл
- ГОСТ 34786-2021 (Меганорм) — область применения, определение P. aeruginosa (п. 3.4), разделы 11 и 12.3
- Отчёт о валидации NF VALIDATION, приложение 1 (2024) — схема эталонного метода ISO 16266: CN-агар, время учёта, подтверждение по типам колоний
- Australian Drinking Water Guidelines: Pseudomonas aeruginosa — где живёт, кому опасна, связь с сыпью и отитом после бассейнов, рост при 41–42 °C
Материал подготовлен редакцией и ждёт проверки экспертами сообщества. Нашли неточность — напишите нам: исправления вносим и отмечаем дату.